A patológiás proteinuria a vese- és húgyúti betegségek egyik legfontosabb és állandó jele. A vizeletprotein-koncentráció meghatározása a vizeletvizsgálat alapvető és fontos eleme. A proteinuria azonosítása és mennyiségi értékelése nemcsak számos primer és szekunder vesebetegség diagnosztizálásában fontos, a proteinuria súlyosságában bekövetkezett változások értékelése a dinamikában a patológiai folyamat lefolyására, a kezelés hatékonyságára vonatkozó információkat tartalmaz. A fehérje kimutatása a vizeletben, még kis mennyiségben is, aggasztónak kell lennie a lehetséges vesebetegség vagy húgyúti traktusok esetében, és újra elemzést igényel. Különös figyelmet érdemel a vizeletkutatás érzékenysége, és különösen a vizeletfehérje meghatározása anélkül, hogy betartanák az összes gyűjtési szabályt.

A vizeletben a fehérje meghatározására szolgáló összes módszer felosztható:

• minőség,
• szemikvantitativ,
• Mennyiségi.

Minőségi módszerek

Valamennyi magas minőségű vizeletmintát a fehérjék különböző fizikai és kémiai tényezők hatására történő denaturálás képességén alapulnak. A vizeletmintában lévő fehérje jelenlétében zavarosság vagy flokkuláló üledék elvesztése tapasztalható.

A vizeletben lévő fehérje meghatározásának feltételei a véralvadási reakció alapján:

1. A vizelet savas legyen. A lúgos vizeletet több (2–3) csepp ecetsavval savanyítjuk (5–10%).
2. A vizeletnek világosnak kell lennie. A zavarosságot egy papírszűrőn keresztül távolítjuk el. Ha a zavarosság nem tűnik el, adjunk hozzá talkumot vagy égetett magnéziumot (kb. 1 teáskanál 100 ml vizeletre), rázzuk és szűrjük.
3. Minőségi vizsgálatot két csőben kell elvégezni, ezek közül az egyik - a vezérlés.
4. A zavarosság keresésének fekete háttéren kell lennie az átvilágított fényben.

A vizeletben a fehérje meghatározásának minőségi módszerei a következők:

Amint azt számos tanulmány kimutatta, a vizeletben lévő fehérjék minőségi meghatározására szolgáló számos ismert módszer nem teszi lehetővé a megbízható és reprodukálható eredmények elérését. Ennek ellenére a legtöbb oroszországi CDL-ben ezeket a módszereket széles körben használják szkrínelésként - a vizeletben pozitív kvalitatív reakcióval a fehérje mennyiségi meghatározását tovább folytatjuk. A kvalitatív reakciók közül a Geller-tesztet és a szulfosalicilsavval végzett mintát gyakrabban használják, azonban a szulfosalicilsavval rendelkező mintát többnyire a patológiás proteinuria kimutatására alkalmasnak tekintik. A forralási próbát jelenleg gyakorlatilag nem használják munkaképessége és időtartama miatt.

Fél-kvantitatív módszerek

A Brandberg-Roberts-Stolnikov módszer a Geller gyűrű teszten alapul, így ugyanazok a hibák figyelhetők meg ezzel a módszerrel, mint a Geller tesztnél.

Jelenleg a diagnosztikai csíkokat egyre inkább a vizelet fehérje meghatározására használják. A fehérje fehérje kvantitatív meghatározása a vizeletben a szalagon, a leggyakrabban használt festék a brómfenol kék citrát pufferben. A vizeletben lévő fehérjetartalmat a kék-zöld szín intenzitása alapján határozzák meg, amely a reakciózóna vizelettel való érintkezése után alakul ki. Az eredményt vizuálisan, vagy vizelet-analizátorokkal mérjük. A száraz kémiai módszerek nagyszerű népszerűsége és nyilvánvaló előnyei (egyszerűség, analízis sebesség) ellenére ezek a vizeletvizsgálati módszerek általában és különösen a fehérjék meghatározása nem jelentenek komoly hibákat. Az egyik, amely a diagnosztikai információk torzulásához vezet, a brómfenol-kék indikátor nagyobb érzékenysége az albuminnal szemben más fehérjékkel összehasonlítva. Ebben a tekintetben a tesztcsíkok főként a szelektív glomeruláris proteinuria kimutatására alkalmazhatók, amikor szinte az összes vizeletfehérjét albumin képviseli. A változások előrehaladtával és a szelektív glomeruláris proteinuria nem szelektív (a vizeletben lévő globulin megjelenésével) átmenetével a fehérje meghatározásának eredményeit alábecsülik a valódi értékekhez képest. Ez a tény teszi lehetetlenné, hogy ezt a módszert a vizeletben lévő fehérje meghatározására használják a vesék állapotának (glomeruláris szűrő) idővel történő meghatározására. A tubuláris proteinuria esetében a fehérjék meghatározásának eredményeit is alábecsülik. A fehérje diagnosztikai csíkokkal történő meghatározása nem megbízható mutatója a proteinuria alacsony szintjének (a jelenleg rendelkezésre álló diagnosztikai csíkok többsége nem képes a fehérjét a vizeletben 0,15 g / l-nél kisebb koncentrációban elkapni). A fehérjék meghatározásának negatív eredményei a csíkokon nem zárják ki a globulinok, hemoglobin, uromucoid, Bens-Jones fehérje és más paraproteinek jelenlétét a vizeletben.

Magas glikoprotein tartalmú nyálkahártya (például a húgyutak gyulladásos folyamataiban, a pyuria, a bakteriuria) a csík indikátorzónájára települhet, és hamis pozitív eredményekhez vezethet. A hamis pozitív eredmények a karbamid nagy koncentrációjával is összefügghetnek. A gyenge megvilágítás és a gyenge színérzékelés pontatlan eredményeket okozhat.

E tekintetben a diagnosztikai csíkok használatát a szűrési eljárásokra kell korlátozni, és a segítségükkel kapott eredményeket csak indikatívnak kell tekinteni.

Mennyiségi módszerek

A vizeletben lévő fehérje megfelelő mennyiségi meghatározása bizonyos esetekben nem könnyű feladat. A megoldás nehézségeit a következő tényezők határozzák meg:

• az egészséges személy vizeletben alacsony fehérjetartalma, gyakran a legtöbb ismert módszer érzékenységének küszöbén;
• számos vegyület jelenléte a vizeletben, amelyek befolyásolhatják a kémiai reakciók lefolyását;
• a vizeletfehérjék tartalmának és összetételének jelentős ingadozása különböző betegségekben, amelyek megnehezítik a megfelelő kalibrációs anyag kiválasztását.

A klinikai laboratóriumokban a vizelet fehérje meghatározására szolgáló úgynevezett „rutin” módszereket használják, de ezek nem mindig kielégítő eredményeket adnak.

A laboratóriumban dolgozó szakember elemzése szempontjából a vizeletfehérje mennyiségi meghatározására szolgáló módszernek meg kell felelnie a következő követelményeknek:

• a kémiai reakció során képződött komplex abszorpciója és a minta fehérje tartalma között a koncentrációk széles tartományában lineáris kapcsolatban áll, így elkerülhető a további műveletek a minta elkészítéséhez a vizsgálathoz;
• egyszerűnek kell lennie, nem igényel a magasan képzett előadót, csak kis számú művelettel kell elvégezni;
• nagy érzékenységű, analitikai megbízhatósággal rendelkeznek, ha kis mennyiségű anyagot használnak;
• ellenálljanak a különböző tényezőknek (a minták összetételének változása, a gyógyszerek jelenléte stb.);
• elfogadható költséggel rendelkeznek;
• könnyen adaptálható az automatikus elemzőkhöz;
• a meghatározás eredménye nem függhet a vizeletminta fehérje összetételétől.

A vizeletben lévő fehérje mennyiségi meghatározására jelenleg ismert módszerek egyike sem támasztja alá teljes mértékben az "arany standardnak".

A vizeletben a fehérje meghatározására szolgáló mennyiségi módszereket turbidimetrikus és kolorimetriás módszerekre lehet osztani.

Turbidimetriás módszerek

A turbidimetriás módszerek a következők:

• fehérje meghatározása szulfosalicilsavval (SSC), t
• fehérje meghatározása triklór-ecetsavval (THC), t
• fehérjék meghatározása benzetónium-kloriddal.

A turbidimetriás módszerek a vizelet fehérjék oldhatóságának csökkentésén alapulnak, a szuszpendált részecskék szuszpenziójának kialakulása következtében a kicsapószerek hatására. A vizsgálati minta fehérjetartalmát a fényszórás intenzitása alapján határozzuk meg, amelyet a fényszóró részecskék száma határoz meg (nefelometrikus elemzési módszer), vagy a kapott szuszpenzió fényáramának gyengítésével (turbidimetriás elemzési módszer).

A vizeletben lévő fehérje detektálására szolgáló csapadékmennyiségekben a fényszórás nagysága számos tényezőtől függ: a reagensek keverésének sebessége, a reakcióelegy hőmérséklete, a közeg pH-ja, az idegen vegyületek jelenléte, a fotometria módszerei. A reakciókörülmények gondos betartása hozzájárul az állandó részecskeméretű stabil szuszpenzió kialakulásához és viszonylag reprodukálható eredményekhez.

Egyes gyógyszerek befolyásolják a fehérjék meghatározására szolgáló turbidimetriás módszerek eredményeit, ami az úgynevezett "hamis pozitív" vagy "hamis negatív" eredményekhez vezet. Ezek közé tartoznak az antibiotikumok (benzilpenicillin, kloxacillin, stb.), A radioaktív jódtartalmú anyagok, a szulfátok.

A turbidimetriás módszerek gyengén szabványosítottak, gyakran hibás eredményekhez vezetnek, de ennek ellenére a laboratóriumokban széles körben használják a reagensek alacsony költsége és elérhetősége miatt. Oroszországban a legszélesebb körben alkalmazott módszer a fehérje szulfosalicilsavval történő meghatározása.

Kolorimetriás módszerek

A legérzékenyebb és legpontosabbak a vizelet teljes fehérje meghatározására szolgáló kolorimetriás módszerek, specifikus színprotein-reakciók alapján.

Ezek a következők:

1. biuret reakció,
2. Lowry módszer
3. a különböző színezékek fehérjékkel való komplexképző képességén alapuló módszerek:
   • Ponceau S (Ponceau S)
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Brilliant Blue
   • Pyrogallol piros.

Az előadó szemszögéből, a laboratórium mindennapi munkájában, nagy kutatási áramlattal, a biuret-módszer a műveletek nagy száma miatt kényelmetlen. Ugyanakkor a módszer magas analitikai megbízhatósággal jellemezhető, lehetővé teszi a fehérjék széles körben történő meghatározását és hasonló érzékenységű albumin, globulinok és paraproteinek kimutatását, aminek következtében a biuret módszer referenciaként szolgál, és más fehérjék kimutatására szolgáló analitikai módszerek összehasonlítására ajánlott. A vizeletben a fehérje meghatározására szolgáló biuret-eljárást előnyösen a nefrológiai osztályokat kiszolgáló laboratóriumokban végezzük, és olyan esetekben használjuk, ahol a meghatározás más módszerekkel történő eredményei megkérdőjelezhetők, valamint a napi fehérjeveszteség mennyiségének meghatározására a nefrológiai betegekben.

A Lowry-módszer, amely nagyobb a biuret-módszerrel szembeni érzékenysége, kombinálja a biuret-reakciót és a Folin-reakciót a proteinmolekulában lévő tirozin- és triptofán-aminosavakkal. A nagy érzékenység ellenére ez a módszer nem mindig megbízható eredményt ad a vizelet fehérjetartalmának meghatározásakor. Ennek oka a Folin reagensének nem specifikus kölcsönhatása a vizelet nem fehérje komponenseivel (leggyakrabban aminosavakkal, húgysavval, szénhidrátokkal). Ezek és más vizelet komponensek elválasztása dialízissel vagy fehérje kicsapással lehetővé teszi, hogy ezt a módszert sikeresen alkalmazzuk a vizelet fehérje mennyiségi meghatározására. Egyes gyógyszerek - szalicilátok, klórpromazin, tetraciklinek képesek befolyásolni ezt a módszert, és torzítják a vizsgálat eredményeit.

A megfelelő érzékenység, a jó reprodukálhatóság és a fehérjék kötési színezéssel történő meghatározása megkönnyíti ezeket a módszereket, de a reagensek magas költsége megakadályozza azok szélesebb körű alkalmazását laboratóriumokban. Jelenleg a pirogallol vörös módszer egyre gyakoribbá válik Oroszországban.

A proteinuria szintjének tanulmányozása során figyelembe kell venni, hogy a proteinuria meghatározására szolgáló különböző módszerek különböző érzékenységgel és specifitással rendelkeznek számos vizeletfehérjével szemben.

Az empirikus adatok alapján ajánlott két különböző módszerrel meghatározni a fehérjét, és a következő képletek egyikével számítani a valós értéket:

proteinuria = 0,4799 B + 0,5230 L;
proteinuria = 1,5484 B - 0,4825 S;
proteinuria = 0,2167 S + 0,7579 L;
proteinuria = 1,0748 P - 0,0986 B;
proteinuria = 1,0104 P - 0,0289 S;
proteinuria = 0,8959 P + 0,0845 L;

ahol:
B - mérési eredmény a Coomassie G-250-rel;
L a Lowry reagensével kapott mérési eredmény;
P - mérési eredmény pirogallol-molibdáttal;
S a szulfosalicilsavval kapott mérési eredmény.

Figyelembe véve a proteinuria szintjének a nap különböző szakaszaiban tapasztalt erőteljes ingadozását, valamint a vizelet fehérje koncentrációjának a diurézisre gyakorolt ​​függőségét, az egyes vizeletadagok eltérő tartalmát, most már gyakori, hogy a vesepatológiában a proteinuria súlyosságát a vizeletben lévő napi fehérjeveszteség, azaz az ún. napi proteinuria. Ezt g / napban fejezzük ki.

Ha nem lehet napi vizeletet gyűjteni, ajánlatos a fehérje és a kreatinin koncentrációjának meghatározása egyetlen vizeletadagban. Mivel a nap folyamán a kreatinin felszabadulás aránya meglehetősen állandó és nem függ a vizelési sebesség változásától, a fehérje-koncentráció és a kreatinin-koncentráció aránya állandó. Ez az arány jól korrelál a fehérje napi kiválasztásával, ezért felhasználható a proteinuria súlyosságának értékelésére. A normál fehérje / kreatinin aránynak 0,2-nél kisebbnek kell lennie. A fehérjét és a kreatinint g / l-ben mérjük. A fehérje-kreatinin aránya által a proteinuria súlyosságának értékelésére szolgáló módszer fontos előnye a napi vizelet képtelenségével vagy hiányos gyűjtésével kapcsolatos hibák teljes megszüntetése.

Irodalom:

• O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya M., J. Mikhailov, "Proteinuria kimutatásának és értékelésének klinikai szempontjai", a CPL vezetőjének kézikönyve, 1. szám, 2007. január
• A. Kozlov A., "Proteinuria: módszerek annak kimutatására", előadás, Szentpétervár, SPbMAPO, 2000
• VL Emanuel, „A vesebetegség laboratóriumi diagnózisa. Húgyúti szindróma ”, - a KDL fejének vezetője, 2006. december 12.
• VI Pupkova, L.M. Prasolov - A fehérje meghatározása a vizeletben és a cerebrospinális folyadékban. Koltsovo, 2007
• Klinikai laboratóriumi kutatási módszerek. Ed. E. A. Kost. Moszkva, "Orvostudomány", 1975

Kapcsolódó cikkek

Kvantitatív módszerek a vizelet teljes mennyiségének meghatározására

Bármely vizeletminta alkalmas a fehérje mennyiségi meghatározására. A legtöbb kutató úgy dönt, hogy meghatározza a naponta összegyűjtött vizeletben lévő fehérje mennyiségét annak érdekében, hogy megbizonyosodjon a fehérje napi veszteségéről.

Szakasz: Vizeletelemzés

Fél-kvantitatív módszerek a vizeletben lévő teljes fehérje meghatározására

Jelenleg a diagnosztikai csíkokat egyre inkább a vizelet fehérje meghatározására használják. A fehérje fehérje kvantitatív meghatározása a vizeletben a szalagon, a leggyakrabban használt festék a brómfenol kék citrát pufferben. A vizeletben lévő fehérjetartalmat a kék-zöld szín intenzitása alapján határozzák meg, amely a reakciózóna vizelettel való érintkezése után alakul ki.

Szakasz: Vizeletelemzés

Minőségi eljárások a fehérje teljes mennyiségének a vizeletben történő meghatározására

Valamennyi magas minőségű vizeletmintát a fehérjék különböző fizikai és kémiai tényezők hatására történő denaturálás képességén alapulnak. A vizeletmintában lévő fehérje jelenlétében zavarosság vagy flokkuláló üledék elvesztése tapasztalható.

Szakasz: Vizeletelemzés

A vizelet fehérje meghatározása a mintában 20% -os szulfosalicilsavval

A 20% -os szulfosalicilsavat tartalmazó minta a fehérjék vizeletben történő meghatározására szolgáló minőségi reakciókra utal. Mivel a véralvadási reakción alapul, a vizsgált vizeletnek meg kell felelnie bizonyos követelményeknek: átláthatónak és savreakciónak kell lennie.

Szakasz: Vizeletelemzés

Geller gyűrű teszt

A Geller gyűrűvizsgálat minőségi reakció a vizelet fehérje meghatározására. Mivel a véralvadási reakción alapul, a vizsgált vizeletnek meg kell felelnie bizonyos követelményeknek: átláthatónak és savreakciónak kell lennie.

Szakasz: Vizeletelemzés

A vizeletben lévő fehérje meghatározásának módszerei

Kis mennyiségű fehérje a napi vizeletben szintén teljesen egészséges egyénekben található, azonban az ilyen kis koncentrációk egyetlen adagban nem észlelhetők a jelenleg használt módszerekkel. Egy egészséges ember vizeletfehérjéinek körülbelül 70% -aa uromukoidot jelent, amely a vese szövet terméke; így a glomeruláris fehérje aránya az egészséges emberek vizeletében elhanyagolható, és a proteinuria általában 50–150 mg / nap, a legtöbb vizelet fehérje megegyezik a tejsavóval.

Elfogadható, hogy a származási helytől függően megkülönböztetjük a proteinuria következő formáit: a prerenalis, a fokozott szövetfehérje-lebomláshoz kapcsolódó súlyos hemolízis; vese, a vesék patológiája miatt, amely glomeruláris és tubuláris; a húgyutak patológiájával összefüggő, és leggyakrabban gyulladásos exudáció által okozott postrenális hatás.

A létezés időtartamától függően tartós proteinuria keletkezik, amely több hétig és akár évekig is fennáll, és átmeneti, rendszeresen megjelenő, néha még vesebetegség hiányában is, lázzal és súlyos mérgezéssel. Célszerű megkülönböztetni a proteinuria variabilitását: a napi fehérjeveszteség legfeljebb 1 g - mérsékelt, 1-3 g - közepes és 3 g-nál nagyobb.

A viszonylag nagy molekulatömegű fehérjék kimutatása a vizeletben azt jelzi, hogy a vese szűrőjének szelektivitása és a kifejezett károsodása hiányzik. Ezekben az esetekben beszéljen a proteinuria alacsony szelektivitásáról. Ezért a vizeletfehérje frakciók meghatározása jelenleg széles körben elterjedt. A legpontosabb módszerek a keményítő és a poliakrilamid gélek elektroforézise.
Az ilyen módszerekkel kapott eredmények szerint a proteinuria szelektivitása megítélhető.

A vizeletben a fehérje meghatározására szolgáló legtöbb kvalitatív és mennyiségi módszer a vizelet térfogatában vagy a tápközeg (vizelet és sav) közötti kölcsönhatáson alapul; ha van mód a koaguláció intenzitásának mérésére, akkor a minta kvantitatív lesz.

Egységes szulfosalicilsav-vizsgálat:

Szükséges reagens:

20% -os szulfosalicilsavoldat.

A tanulmány folyamata:

2 tesztcsőben 3 ml szűrt vizeletet öntsünk. A tesztcsőben 6-8 csepp reagenst adunk. Sötét háttéren hasonlítsa össze a vezérlőcsövet egy tapasztalt. A kémcsőben a zavarosság jelzi a fehérje jelenlétét, a mintát pozitívnak tekintjük.

Ha a vizelet reakciója lúgos, akkor a vizsgálat előtt 2-3 csepp 10% -os vizes ecetsavoldattal megsavanyítjuk.

Brandberg-Roberts-Stolnikov egységesített módszer:

A módszer a Geller gyűrűmintán alapul, amely abból áll, hogy a salétromsav és a vizelet határán fehérje jelenlétében koaguláció lép fel, és fehér gyűrű jelenik meg.

Szükséges reagens:

30% -os salétromsavoldat (relatív sűrűség 1,2) vagy Larionic reagens.
A reagens készítése Larion: 20-30 g nátrium-kloridot feloldunk 100 ml desztillált vízben való melegítéssel, hagyjuk lehűlni, szűrjük. A szűrlet 99 ml-ére 1 ml tömény salétromsavat öntünk.

A tanulmány folyamata:

1-2 ml salétromsavat (vagy Larionsav-reagenst) öntünk a csőbe, és óvatosan, a cső falán át ugyanolyan mennyiségű szűrt vizeletet rétegezünk. A vékony fehér gyűrű megjelenése két folyadék felületén a 2. és 3. perc között a fehérje jelenlétét mutatja körülbelül 0,033 g / l koncentrációban. Ha a gyűrű a rétegezés után 2 perccel előbb jelenik meg, a vizeletet vízzel kell hígítani és a már hígított vizeletet újra rétegezni. A vizelet hígítási fokát a gyűrű típusától, azaz a gyűrű típusától függően választjuk ki. annak szélessége, tömörsége és megjelenési ideje. A szálszerű gyűrűvel, amely 2 perc múlva megjelent, a vizeletet 2-szer hígítjuk, széles, egy-négyszeres, tömör egy - 8 alkalommal, stb. A fehérje koncentrációját úgy számítjuk ki, hogy 0,033-at megszorozzuk a hígítási sebességgel, és grammban 1 l-ben (g / l) fejezzük ki.

Néha fehér gyűrűt kapunk, ha nagy mennyiségű urát van jelen. A fehérje gyűrűvel ellentétben az urát valamivel magasabb, mint a két folyadék közötti határ, és enyhén felmelegszik.

A vizeletben lévő fehérje mennyiségi meghatározása zavarosság miatt, szulfosalicilsav hozzáadásával:

A módszer alapelve:

A szulfosalicilsavval történő fehérje koaguláció során a zavarosság intenzitása arányos a koncentrációjával.

Szükséges reagensek:

1. 3% szulfosalicilsavoldat.

2. 0,9% nátrium-klorid-oldat.

3. Standard albumin-oldat - 1% -os oldat (1 ml 10 mg albumint tartalmazó oldat): 1 g liofilizált albumint (emberi vagy szarvasmarha-szérumból) kis mennyiségű 0,9% -os nátrium-klorid-oldatban oldunk egy 100 ml-es térfogatú lombikban. Ezután az oldatot ugyanazzal az oldattal állítjuk be a jelre. A reagenst 1 ml 5% -os nátrium-azid-oldat (NaN3) hozzáadásával stabilizáljuk. Hűtőszekrényben tárolva a reagens 2 hónapig érvényes.

Speciális felszerelés - fotoelektromos koloriméter.

A tanulmány folyamata:

1,25 ml szűrt vizeletet vezetünk be egy kémcsőbe, töltöttük fel 5 ml-re 3% -os szulfozicilsav-oldattal, és összekeverjük. 5 perc múlva 590–650 nm-es hullámhosszon (narancssárga vagy piros fényszűrő) mértük a fényelektromos kolorimétert egy 5 mm-es optikai úthosszúságú cellában. A kontroll egy cső, amelyben 1,25 ml szűrt vizeletet adunk hozzá 5 ml 0,9% -os nátrium-klorid-oldathoz. A számítást a kalibrációs ütemterv szerint végzik, amelynek elkészítéséhez a standard oldatból hígításokat készítünk, a táblázatban megadottak szerint.

Minden kapott oldatból 1,25 ml-t veszünk, és kísérleti mintákként kezeljük.

A kalibrációs gráf kialakításakor a lineáris függőség 1 g / l-ig tárolódik. Magasabb koncentrációknál a mintát hígítani kell, és figyelembe kell venni a számításban a hígítást.

Hamis pozitív eredményeket lehet elérni, ha a vizeletben lévő szerves jódot tartalmazó kontrasztanyag van. Ezért a teszt nem alkalmazható jódkészítményeket szedőknél; a hamis pozitív eredmény a szulfanilamid-készítmények, a nagy penicillin-dózisok és a húgysav vizeletének magas koncentrációi is lehetnek.

Biuret módszer:

A módszer alapelve:

A fehérje peptidkötéseinek lúgos C-savas sóival lila színű komplexet képeznek. A fehérjéket triklór-ecetsavval előzetesen kicsapjuk.

Szükséges reagensek:

1. 10% triklór-ecetsavoldat.
2. 20% rézoldat (CuSO4 + 5H2O).
3. 3% -os nátrium-hidroxid-oldat.

A tanulmány folyamata:

A napi mennyiségből vett 5 ml vizelethez adjunk hozzá 3 ml triklór-ecetsav-oldatot, centrifugáljuk egy állandó mennyiségű üledékbe. A felülúszót pipettával szívjuk le, a csapadékot 5 ml NaOH-oldatban oldjuk. Az oldathoz 0,25 ml CuSO4-t adunk, az elegyet keverjük és centrifugáljuk. A felülúszót 540 nm hullámhosszon fotometráljuk egy küvettában, amelynek optikai út hossza 10 mm a desztillált vízzel szemben. A fehérje koncentrációját a kalibrációs görbéből számítjuk ki, miközben a grafikázás során a fehérje koncentrációját (g / l) az y-tengelyre és az abszcissza tengelyen lévő kioltási egységek optikai sűrűségét ábrázoljuk. A kapott koncentráció alapján a napi fehérjeveszteséget a vizeletben számítják ki.

Jelzőpapír (szalagok) használata:

A fehérjét a „Albuphan”, az „Ames” (Anglia), az „Albustix”, a „Boehringer” (Németország), a „Comburtest” stb.

Az elv az egyes sav-bázis indikátorok úgynevezett fehérje hibáján alapul. A papír indikátor része tetrabrom-fenol-kék és citrát-pufferrel van telítve. Amikor a papírt megnedvesítjük, a puffer feloldódik és a megfelelő pH-t biztosítja a indikátor-reakcióhoz.

3,0-3,5 aminosav-csoportban a fehérjék reagálnak a jelzővel és megváltoztatják eredeti sárga színét zöldes kékre, majd a színskálához képest a fehérje koncentrációját nagyjából becsülhetjük a vizeletben. A jelzőszalagok megfelelő működésének fő feltétele, hogy a reakció 3,0-3,5 tartományban legyen.

Ha a papír a vizsgált vizelettel hosszabb ideig érintkezik, mint az utasításokban meghatározott expozíció, a citrát puffer feloldódik benne, majd a indikátor reagál a vizelet valós pH-jára, azaz hamis pozitív reakciót ad. Tekintettel arra, hogy a pufferkapacitás korlátozott, még akkor is, ha az iránymutatásokat túl lúgos vizeletmintákban (pH> 6,5) követik, hamis pozitív eredményeket kapnak, és a túl vizes vizeletből (pH 6,5) a vizelet alacsony relatív sűrűségű mintáinál. a vizelet és a bens jones fehérje alacsony koncentrációja.

Szükséges reagensek:

2 M acetát puffer pH 4,9.

A tanulmány folyamata:

A szűrt vizeletet 4 ml mennyiségben 1 ml pufferrel elegyítjük és 15 percig melegítjük vízfürdőben 56 ° C hőmérsékleten. Bens-Jones fehérjék jelenlétében 2 percen belül kifejezett csapadék jelenik meg, és ha a Bens-Jones fehérje koncentrációja kisebb, mint 3 g / l, a minta negatív lehet. A gyakorlatban ez rendkívül ritka, mivel a Bens-Jones fehérje koncentrációja a vizeletben nagyrészt jelentős.

Teljes bizonyossággal a Bens-Jones fehérje immunoelektroforetikus vizsgálattal detektálható, specifikus szérumokat alkalmazva az immunglobulinok nehéz és könnyű láncai ellen.

Az albumosis (proteózis) meghatározása:

Az albumózisok fehérje hasítási termékei, amelyek elve azon a tényen alapul, hogy nem forralnak, amikor forraljuk, de pozitív biuret reakciót adnak, és néhány sóval, különösen ammónium-szulfáttal és cink-acetáttal savas közegben sózzák.

A normál vizelet nem tartalmaz albumosist. A nyomok normál vizeletben lehetnek a sperma szennyeződése esetén. A patológiában az albumosis a vizeletben fordulhat elő lázas állapotok, vér és plazma transzfúziók, exudátumok és transzudátok reszorpciója és a daganatok szétesése során.

Szükséges reagensek:

1. Telített nátrium-klorid-oldat.
2. Koncentrált nátrium-nátrium-oldat.
3. Réz-szulfát gyenge oldata (szinte színtelen).

A tanulmány folyamata:

Az ecetsavval megsavanyított vizelettel telített vizes nátrium-klorid-oldatot (1/3 térfogat) adunk hozzá, főzzük és a forró folyadékot szűrjük. Az albumózisok átjutnak a szűrletbe, amelyben jelenlétüket biuret reakcióval határozzuk meg. A szűrlethez hozzáadunk 1/2 térfogat tömény nátrium-karbonát-oldatot és néhány csepp gyenge réz-szulfát-oldatot. Pozitív mintával vörös-lila színt kapunk.

A szulfosalicilsavval végzett pozitív vizsgálattal a vizeletet felmelegítik. Ha a zavarosság megszűnik, és lehűl, akkor azt jelenti, hogy a vizelet albuminokat vagy a Bens-Jones fehérje testét tartalmazza.

Fehérje a vizeletben, laboratóriumi vizsgálatok

Módszerek a vizelet fehérje meghatározására

A klinika számára a fehérje kvalitatív és mennyiségi meghatározása a vizeletben.

Minőségi vizsgálatok a vizelet fehérje meghatározására
Több mint 100 reakciót javasolnak a vizeletben lévő fehérje minőségi meghatározására. Legtöbbjük a fizikai (fűtés) vagy kémiai eszközökkel történő fehérjék kicsapódásán alapul. A fehérje jelenlétét a zavarosság megjelenése igazolja.

Érdekesek a kolorimetriás száraz minták is.

Az alábbiakban csak a minta gyakorlatának legfontosabb elemét írjuk le.

Szulfozicilsav-vizsgálat. Néhány milliliter vizelethez 2-4 csepp 20% -os szulfosalicilsavoldatot adunk. Ha egy pozitív reakció zavaros. Az eredményt a következő kifejezések jelölik: opaleszcencia, gyengén pozitív, pozitív vagy erősen pozitív reakció. A szulfosalicilsav-teszt egyike a legérzékenyebb mintáknak a vizeletben lévő fehérje létrehozására. Még a vizelet fehérje legkisebb kóros növekedését is találja. Egy egyszerű technikának köszönhetően ez a teszt széles körben alkalmazható.

Teszt aszeptollal. Az aszeptol helyettesíti a szulfosalicilsavat. Előállítható bármely laboratóriumban rendelkezésre álló anyagokból (fenol és kénsav). Reagensként 20% aseptol oldatot használunk. A vizsgálatot az alábbiak szerint végezzük: 2-3 ml vizeletet tartalmazó kémcsőben 0,5-1-1 ml aseptol oldatot adunk az aljzathoz. Ha a két folyadék közötti határon fehér koagulált fehér gyűrű jön létre, a minta pozitív.

Geller tesztje. Néhány milliliter vizeletben 1-2 ml 30% -os salétromsavat (fajlagos tömeg 1,20) sózunk. Ha mindkét folyadék felületén fehér gyűrű keletkezik, a minta pozitív. A reakció pozitív, ha a fehérje nagyobb, mint 3,3 mg. Néha fehér gyűrűt kapunk, ha nagy mennyiségű urát van jelen. A fehérje gyűrűvel ellentétben az urátgyűrű nem jelenik meg a két folyadék határán, de kissé magasabb. Larionova azt javasolja, hogy a 30% -os salétromsav helyett reagensként 1% -os salétromsavoldatot használjon telített nátrium-klorid-oldatban; Ez nagy megtakarítást biztosít a salétromsavban.

Minta zhezezisztosinerodisty káliummal és ecetsavval. Ez a reakció lehetővé teszi a szérumfehérjék nukleoalbuminból történő izolálását.

Egyenlő mennyiségű vizeletet két csőbe öntünk. Az egyikben adjunk hozzá néhány csepp 30% -os ecetsavoldatot. Ha a kontroll csőhöz képest zavarosságot kapunk, a vizelet nukleoalbumint tartalmaz. Ha nem jelenik meg zavarosság, mindkét cső tartalmát összekeverjük és újra két részre osztjuk. A két vizsgálati cső egyikében adjunk hozzá néhány csepp (a felesleg pozitív negatívvá válik) a sárga vér sójának (kálium-ferrocianidszirup) 10% -os oldatának. Tejsavófehérjék jelenlétében zavarosságot kapunk.

A nagy mennyiségű húgysavat és urátot tartalmazó koncentrált vizelettel ferrit és szirup káliumot és ecetsavat tartalmazó mintát kell készíteni a vizelet előzetes hígítása (2-3-szor) után. Ellenkező esetben előfordulhat a kicsapódott húgysav okozta zavarosság.

Ez különösen fontos a csecsemők vizeletének vizsgálatában, amely sok vizeletsavat és urátot tartalmaz.

A fehérjék kicsapódásán alapuló fehérjék fehérjéből származó többi minőségi minta közül a következők voltak: forráspont, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia stb.

A fehérjék lerakódásán alapuló, magas színvonalú minták előállítására a vizeletben a következő általános szabályokat kell figyelembe venni, amelyek megsértése jelentős hibákat eredményez a vizsgálatban.

1. A vizsgálandó vizeletnek savasnak kell lennie. Lúgos reakcióval a vizeletet ecetsavval enyhén savanyítjuk. A minta lúgos vizelettel történő előállítása olyan esetekben, amikor egy savat reagensként használnak, a sav semlegesítéséhez és negatív eredményhez vezethet pozitív reakcióval. Ez különösen igaz a szulfosalicilsav-vizsgálatra, mivel a savat nagyon kis mennyiségben adjuk hozzá, és könnyen semlegesíthető.

2. A vizsgált vizeletnek átlátszónak kell lennie.

3. A fehérjéket a vizeletben lévő mintákat mindig két csőben kell elvégezni, amelyek közül az egyik kontrollként szolgál. Vezérlőcső nélkül nem észlelhető a könnyű zavarosság a reakciók során.

4. A mintákban hozzáadott sav mennyisége nem lehet túl nagy. Nagy mennyiségű sav vezethet oldható acidolbumin képződéséhez és egy pozitív minta negatívvá tételéhez.

Egyszerű technikájuk miatt a kolorimetriás száraz minták nagy figyelmet érdemelnek. Amikor ezeket a mintákat használjuk, a fehérje hatása az indikátor színére a pufferoldatban (úgynevezett fehérje hibajelzők). A citromsav-pufferrel és a bróm-fenol kék mintájú infúzióban lévő szűrőpapír rövid ideig felszívódik a vizelettel. A minta pozitív, ha kék-zöld színűvé válik. Összehasonlítva a színezés intenzitását színpapír szabványokkal, megközelítőleg és mennyiségi következtetéseket lehet levonni. A jelzőpapírt a megfelelő színstandardokkal, például az univerzális jelzőpapírokkal csomagolják.

A vizelet fehérje mennyiségi meghatározásának módszerei
Számos módszert javasoltak a vizelet fehérje mennyiségi meghatározására. A biológiai anyagban lévő fehérjék pontos kvantitatív módszereit nem alkalmazzák széles körben a vizeletben lévő fehérje meghatározásában, komplex és időigényes technikák miatt. A térfogati módszerek elterjedtek, különösen az Esbach-módszer. Nagyon egyszerűek, de sajnos nem nagyon pontosak. A Brandberg-Stolnikov-csoport módszerei, amelyek pontosabb eredményeket adnak, mint a térfogati módszerek, viszonylag egyszerű technikával is alkalmasak a klinikára. Egy fotométer vagy nepelométer jelenlétében a nefelometriás módszerek is alkalmasak.

Esbach-módszer. A párizsi orvos Esbach javaslatát 1874-ben javasolta. Egy speciális csövet (Esbach albuminométer) vizeletbe és reagensbe öntünk. A csövet gumidugóval lezárjuk, alaposan keverjük (verés nélkül), és a következő napig álló helyzetben hagyjuk. Jelentse az osztást, amely eléri a fehérje csapadék oszlopát. A talált szám a fehérjetartalmat mutatja. Nagyon fontos az Esbach-módszerrel, hogy a vizelet savas. A lúgos vizelet semlegesítheti a reagens savas összetevőit és megakadályozhatja a fehérjék kicsapódását.

A módszer előnyei: egyszerű és kényelmes a gyakorlatban.

Hátrányok: a módszer pontatlan, az eredményt 24 - 48 óra elteltével kapjuk meg.

Brandberg-Stolnikov módszer. A Geller minőségi tesztjén alapul. A Geller-mintát kvantitatív meghatározásra lehet használni, mivel pozitív eredményt ad a 3,3 mg-ot meghaladó fehérjetartalommal. Ez a végső fehérjekoncentráció, amely alatt a minta negatívvá válik.

Ehrlich és Althausen módosítása. A szovjet tudósok, S. L. Ehrlich és A. Ya, Altgauzen módosították a Brandberg-Stolnikov-módszert, jelezve a kutatás egyszerűsítésének lehetőségeit és az idő megtakarítását a termelésben.

Az első egyszerűsítés a gyűrű megjelenésének idejéhez kapcsolódik. Pontosan a megjelenésének időpontját határozza meg, anélkül, hogy feltétlenül ragaszkodna a 2. és 3. perchez.

A második egyszerűsítés lehetővé teszi annak megállapítását, hogy milyen fajta tenyésztést kell végezni. A szerzők bebizonyították, hogy a kívánt hígítás megközelítőleg a kapott gyűrű típusával határozható meg. Megkülönböztetik a fonalas, széles
és kompakt gyűrű.

A nefelometrikus módszerek közül a Kingsberry és Clark módszer megérdemli. 2,5 ml szűrt vizeletet öntöttünk egy kis mérőhengerbe, amelyet 3% -os vizes szulfosalicilsavoldattal töltünk 10 ml-re. Alaposan keverjük össze és 5 perc múlva 1 cm-es küvettában, sárga szűrővel fotometráljuk, vízzel kompenzáló folyadékként. A Pulfrich fotométerrel a talált extinkció 2,5-szeresével megszorozva adja meg a fehérje mennyiségét% o-ban. Abban az esetben, ha az extinkciós index meghaladja az 1,0 értéket, a vizeletet először hígítjuk 2-szer, 4-szer vagy még többet.

Annak érdekében, hogy világos képet kapjunk a vizeletben kiválasztódó fehérjék mennyiségéről, nem csak a vizelet külön részében lévő koncentrációját kell meghatározni, hanem a napi összmennyiséget is. Ehhez gyűjtsük össze a beteg vizeletét 24 órán át, mérjük a térfogatát milliliterben, és a fehérje koncentrációját a napi vizelet egy részében, g% -ban határozzuk meg. A vizelettel 24 órán belül kiválasztódó fehérjék mennyiségét a napi vizeletmennyiségtől (grammban) határozzuk meg.

A fehérje klinikai jelentősége a vizeletben

A humán vizelet általában minimális mennyiségű fehérjét tartalmaz, amelyet a szokásos kvalitatív vizeletfehérje-vizsgálati mintákkal nem lehet megállapítani. Nagy mennyiségű fehérje kiválasztása, amelyben a vizeletben lévő fehérjék szokásos, jó minőségű mintái pozitívak - egy abnormális jelenség, amit proteinurianak neveznek. A proteinuria csak az újszülöttnél fiziológiás, a születést követő első 4-10 napon belül. Az általánosan használt albuminuria neve rossz, mert nem csak az albumin, hanem más típusú fehérjék (globulinok stb.) Is kiválasztódnak a vizelettel.

Proteinuriát, mint diagnosztikai tünetet, 1770-ben a Cotuno fedezte fel.

A gyermekeknél a legfontosabb funkcionális vese proteinuria a következő:

1. Az újszülött élettani proteinuria. Ez a legtöbb újszülöttnél fordul elő, és nincs negatív jelentősége. Ennek magyarázata egy éretlen vese szűrő, születési sérülés vagy folyadékvesztés az élet első napjaiban. A születés utáni 4-10. Napon az élettani proteinuria eltűnik (koraszülötteknél később). A fehérje mennyisége kicsi. Ez egy nukleoalbumin.

Az újszülött albuminuria, amely hosszú ideig tart, a veleszületett szindróma tünete lehet.

2. Stroke albuminuria. Ezek a vese szűrő normális ingerlékenységének küszöbértékének a jelentős mechanikai, termikus, kémiai, mentális és egyéb irritációk által okozott - a csecsemők folyadékvesztesége (dehidratáció proteinuria), hideg fürdés, bőséges fehérjetartalmú ételek (táplálkozási proteinuria), a vese tapintása (palpatory albuminuria), fizikai túlhajszolt, félelem stb.

A stroke albuminuria könnyebben jelentkezik a gyermekek korai életkorban, mint az idősebb korban és a felnőttekben, mivel a csecsemő és a kisgyermek veséi könnyebben irritálódnak. A csecsemőknél különösen gyakori a dehidratációs albuminuria (táplálkozási zavar, hidrolizálhatóság, toxikózis, hasmenés, hányás).

A stroke albuminuria jóindulatú. Az okok kiküszöbölése után azonnal eltűnnek. Néha leukocitákat, hengereket és vörösvértesteket találnak az üledékben. A fehérje leggyakrabban nukleoalbumin.

3. Ortosztatikus proteinuria. Ez az állapot az óvodai és iskolai korosztály gyermekeinek jellemző. Ez a vese vérellátásának vasomotoros zavarai alapján történik. Az ortostatikus albuminuria (így a neve) jellemzője, hogy csak akkor jelenik meg, amikor a gyermek áll, amikor a gerinc lordotikus helyzetben van. A fekvő helyzetben eltűnik. A nukleoalbumin felszabadul. Kétséges esetekben ortostatikus élményt lehet igénybe venni, amely a következőket foglalja magában: este, egy órával lefekvés előtt a gyermek kiüríti a húgyhólyagot; reggel, kiszállt az ágyból, újra felszabadítja a vizeletet. Ez a vizelet nem tartalmaz fehérjét. Ezután a gyereket 15-30 percig térdre tesszük a háta mögött, mindkét kéz könyöke között meghajlítva. A lordózis helyzetét hozza létre, ami a fehérje felszabadulásához vezet az üledék változása nélkül.

Az ortostatikus albuminuria esetén naponta 8-10 g fehérje szabadul fel.

A szerves renális proteinuria nagy jelentőségű klinikai jelentőséggel bír az összes proteinuria között. Ezeket a szerves vesebetegségek (nefritisz, nefrozis, nephrosclerosis) okozzák. A proteininuria a szerves vesebetegség egyik legfontosabb és legismertebb tünete.

1. Akut és krónikus glomerulonefritisz esetén a proteinuria rendszeresen jelentkezik. A fehérje mennyisége mérsékelt, és nincs összefüggés a proteinuria mértéke és a betegség súlyossága között. Ezzel szemben a krónikus és súlyosabb jáde gyakran fordul elő kisebb mennyiségű fehérjével, mint az akut. Akut nefritisz után, néha hosszú ideig (években), a vizeletben lévő fehérjék kis mennyiségét állapítják meg, amelyeknek nincs kóros jelentősége ("fennmaradó albuminuria"). Nem szabad elfelejteni, hogy a „proteinuria nélküli nephritis” is előfordulhat. Néha a fehérje a vizelet egyik részében található, a másikban pedig nem. Az albumin és a globulinek aránya az akut nefritiszben alacsony, és krónikus nefritisz esetén magasabb.

2. Nephrosclerosis esetén a vizeletben lévő fehérjék mennyisége meglehetősen jelentéktelen, gyakran a betegség fehérje nélküli fehérje formái.

3. Az összes vesebetegség közül a nefrozis a legjelentősebb proteinuriaval fordul elő.

4. Fertőző és toxikus állapotok esetén az úgynevezett lázas és toxikus proteinuria található. Ezek az akut nefrozis, amelyben a fehérje mennyisége kicsi. Ez a csoport magában foglalja a proteinuria görcsös állapotokban (görcsök), hyperthyreosisban, sárgaságban, invaginációkban, enterokolitiszben, égési sérülésekben, súlyos vérszegénységben stb. Ezek az albuminuria jóindulatúak és gyorsan haladnak (átmeneti albuminuria).

5. Amikor a vese stagnál a vesében, az úgynevezett pangásos albuminuria fordul elő, ami a szív- és érrendszeri betegekre jellemző a dekompenzációs szakaszban. A hasi ascitesben és daganatokban is megtalálható.

Lázas, toxikus és pangásos albuminuria esetén a vesefilter fokozott permeabilitása különösen kifejezett. Egyes szerzők szerint ezek közül sok proteinuria a vese parenchyma szerves károsodása nélkül fordul elő.

Az extrarenális albuminuriát általában a fehérje szennyeződések (szekréciók, lebontott sejtek) okozzák, amelyeket a beteg húgyúti és nemi szervek szekretálnak. A cisztopielitisz (pyuria) miatt gyakran extrarenális albuminuriát találtak, ritkábban a vulvovaginitisz, a kalkulus és a húgyúti daganatok miatt.

Amikor az üledékben az extrarenális albuminuria nagyszámú leukocitát és baktériumot talál. A veseelemek szinte soha nem fordulnak elő. A fehérje mennyisége kicsi. A szűrt vagy centrifugált vizelet általában nem eredményez pozitív fehérje mintát.

A pyelitisből kilépő embereknél a bakteriuria és a pyuria után az albuminuria eltűnik.

Fontos hangsúlyozni, hogy a korai gyermekkorban a szerves vesebetegségek rendkívül ritkák, ezért a szerves proteinuria is ritka. Ezek közül főleg lázas és mérgező. A szerves proteinuria-val ellentétben a stroke albuminuria nagyon gyakori a kisgyermekeknél.

Az idősebb gyermekeknél a szerves proteinuria gyakrabban funkcionál. Általánosságban elmondható, hogy az életkor szerint a funkcionális proteinuria kevésbé gyakori, és gyakrabban organikus.

A vizeletben lévő fehérjék elektroforetikus vizsgálata

Számos szerző használja az elektroforetikus eljárást a vizeletben lévő fehérjék tanulmányozására (uroproteinek). A kapott elektroforegramból nyilvánvaló, hogy ugyanolyan minőségi összetételük van, mint a plazmafehérjék. Ez azt jelzi, hogy a vizeletben lévő fehérjék plazmafehérjékből származnak.

A fehérje minőségi és mennyiségi meghatározása a vizeletben.

Normál értékek: a vizeletben lévő normál fehérje minimális mennyiségben van jelen, amit a szokásos minőségi reakciók nem érzékelnek. A vizeletben a fehérje normájának felső határa 0,033 g / l. Ha a fehérjetartalom meghaladja ezt az értéket, akkor a kiváló minőségű fehérjeminták pozitívak lesznek.

A definíció klinikai jelentősége:

A fehérje megjelenése a vizeletben proteinuria. Proteinuria lehet hamis és vese. Az extrarenális proteinuria a nemi szervekből származó fehérje eredetű szennyeződések (vaginitis, urethritis stb.) Jelenléte lehet, míg a fehérje mennyisége jelentéktelen - akár 0,01 g / l-ig. A renális proteinuria funkcionális (hipotermiával, fizikai terheléssel, lázzal) és organikus - glomerulonefritissal, pyelonefritissel, nefritissel, nefrozissal, veseelégtelenséggel. Vese proteinuria esetén a fehérjetartalom 0,033-10-15 g / l lehet, néha magasabb.

A módszer alapelve: azon a tényen alapul, hogy a szervetlen savak hatására fehérje koagulál (láthatóvá válik). A zavarosság mértéke a fehérje mennyiségétől függ.

Fehérje kimutatása a vizeletben 20% -os szulfosalicilsavval.

Reagensek: 20% -os szulfosalicilsavoldat. Felszerelés: sötét háttér.

1. A vizeletre vonatkozó követelmények: a vizeletnek savas (vagy enyhén savas) pH-nak kell lennie, átláthatónak kell lennie, ehhez a vizeletet centrifugáljuk. A lúgos vizeletet gyengén savas reakcióközeggé savanyítjuk, a kontroll indikátorpapír segítségével.

2. Két azonos átmérőjű kémcsőben 2 ml elkészített vizeletet öntsünk. 1 kémcső - vezérlés, 2 - tapasztalat. A kémcsőbe 4 csepp 20% -os szulfosalicilsavat adunk.

3. Az eredmény sötét háttéren van jelölve.

4. Fehérje jelenlétében a vizsgálati csőben lévő vizelet zavaros.

Kiváló minőségű fehérje meghatározása a vizeletben tesztcsíkokkal.

A proteinuria azonosításához különböző monotest csíkokat használnak: Albufan, Albustiks, Biofan E és politikai vizsgálatok: Triscan, Nonafan és mások.

Fehérje kimutatása a vizeletben Roberts - Stolnikov módszerével.

A módszer alapelve: azon a tényen alapul, hogy a szervetlen savak hatására fehérje koagulál (láthatóvá válik). A zavarosság mértéke függ a fehérje mennyiségétől (azaz a Geller gyűrű tesztjétől). Amikor a fehérje koncentrációja a vizeletben 0,033 g / l, a vizelet rétegződése után 3 perccel egy vékony fehér szál jelenik meg.

Reagensek: salétromsav vagy Roberts reagens 50% -os oldata (98 rész telített nátrium-klorid-oldat és 2 rész koncentrált sósav) vagy Larionic reagens (98 rész telített nátrium-klorid-oldat és 2 rész tömény salétromsav).

Felszerelés: sötét háttér.

1. A vizeletre vonatkozó követelmények: a vizeletnek savas (vagy enyhén savas) pH-nak kell lennie, átláthatónak kell lennie, ehhez a vizeletet centrifugáljuk. A lúgos vizeletet gyengén savas reakcióközeggé savanyítjuk, a kontroll indikátorpapír segítségével.

2. Öntsünk 2 ml 50% -os salétromsav-oldatot vagy egy reagenset egy kémcsőbe, majd óvatosan öntsünk ugyanazt a mennyiségű előkészített vizeletet pipettával a cső falán.

3. A minta 3 percig marad

4. 3 perc múlva jelentse az eredményt. Az eredményt sötét háttéren jelölik az átvilágított fény. Ha a gyűrű széles, kompakt, akkor a vizeletet desztillált vízzel hígítjuk, majd ismét a reagensre rétegezzük.

5. A vizeletet 3 percig hígítjuk, majd vékony szálgyűrűt alakítunk ki.

6. A vizeletben lévő fehérjetartalom kiszámítása a következő képlet szerint történik:

C = 0,033 g / l x hígítási fok.

194.48.155.245 © studopedia.ru nem a közzétett anyagok szerzője. De biztosítja a szabad használat lehetőségét. Van szerzői jog megsértése? Írjon nekünk | Kapcsolat.

AdBlock letiltása!
és frissítse az oldalt (F5)
nagyon szükséges

"A fehérje meghatározása a vizeletben" gyakorlati osztályok módszertani fejlesztése (1 kurzus)

Fővárosi Képzési Központ
Moszkva

Téma: A vizelet fehérje meghatározása.

Célkitűzés: A vizelet kémiai tulajdonságainak tanulmányozása.

A vizelet fehérje meghatározásának mennyiségi és minőségi módszereinek tanulmányozása;

Ismerje meg az automatikus elemzők tesztcsíkjainak használatának alapelveit.

A foglalkoztatás típusa: praktikus (6 óra)

A hallgatónak tudnia kell:

Minőségi minták a fehérje meghatározásához.

Roberts - Stolnikov módszer.

3% SSC fehérje meghatározása.

Biuret fehérje meghatározási módszer (THU).

A kutatási mutatók diagnosztikai értéke.

A hallgatónak képesnek kell lennie:

Készítsen munkahelyet a vizeletvizsgálathoz.

Készítsen reagenseket, edényeket és berendezéseket a vizsgálathoz.

A vizelet kémiai tulajdonságainak (a vizeletben lévő fehérjék kvalitatív és mennyiségi módszerekkel) meghatározása.

Üres termékekkel végzett munka (elemzési formák tervezése).

Helyesen értelmezze a tanulmány eredményeit.

A cél elérésének eszközei:

1. Jegyzetek, oktatási és speciális irodalom.

2. A gyakorlati gyakorlatok előkészítése a tanár módszertani ajánlásaival, a gyakorlati munka végrehajtásával és végrehajtásával.

3. Információs eszközökkel dolgozni elektronikus és papírmédiában.

Berendezés tantermi és irodai munkaállomásokhoz:

a diákok száma szerint;

tanár munkahelye;

speciális bútorok és berendezések.

Műszaki képzési eszközök:

számítógépek a tanár és a diákok munkahelyének felszereléséhez;

az audiovizuális információk megjelenítésére szolgáló műszaki eszközök;

audiovizuális oktatási segédeszközök (bemutató, képzési videó).

A lecke elsajátításának eredménye:

Gyakorlati szakmai készségek és gyakorlati tapasztalatok kialakítása, beleértve a szakmai (PC) és az általános (QA) kompetenciákat:

PC 1.1. Készítsen munkahelyet laboratóriumi klinikai vizsgálatokhoz.

PC 1.2. Biológiai anyagok laboratóriumi klinikai vizsgálatának elvégzése.

PC 1.3. Jegyezze fel a kutatás eredményeit.

PC 1.4. A használt anyagot ártalmatlanítsa, fertőtlenítse és sterilizálja a használt laboratóriumi üvegeszközöket, eszközöket és védőfelszereléseket.

OK 1. A jövőbeli szakma természetének és társadalmi jelentőségének megértése, folyamatos érdeklődés az iránt.

OK 2. Szervezze meg saját tevékenységét, válassza ki a szakmai feladatok elvégzésének módszereit és módszereit, értékelje azok hatékonyságát és minőségét.

OK 6. Dolgozzon egy csapatban és egy csapatban, hatékonyan kommunikáljon kollégáival, vezetésével, betegekkel.

OK 9. A szakmai tevékenységben bekövetkezett technológiai változás feltételeinek irányítása.

OK 13. Munkahely megszervezése a munkavédelem, az ipari higiénia, a fertőző és tűzbiztonság követelményeinek megfelelően.

I modul. Az elméleti rész a független munka elemeivel

1. feladatszám. Tanulmányozza és vázolja a munkafüzetek tananyagát.

Egy egészséges ember általában kevesebb, mint 0,002 g / l, és ritkán legfeljebb 0,012 g / l fehérjét tartalmaz, és általában ezt a vizelet-fehérjetartalmat „nyomokban” nevezik, és az egészséges humán vizeletben hagyományos kémiai módszerekkel nem észlelhető.

A különböző napszakokban gyűjtött vizeletrészek fehérje tartalma jelentősen változhat.

A vizeletben lévő fehérjét proteinurianak nevezik.

A fehérje napi veszteségétől függően a proteinuria következő fokozatai különböznek: mérsékelt - 1 g; közeg - 1-3 g; kifejezett - több mint 3 g.

A proteinuria két fő típusa van:

Proteinuria, melyet a húgyúti betegségek okoznak;

proteinuria, a vesék elváltozásai (betegségei).

A húgyutak gyulladásos folyamataihoz kapcsolódó proteinuria, amelyhez jelentős számú leukocitát vagy eritrocitát jelenít meg a vizeletben, ami azonban nem szünteti meg a vizeletben a fehérje egyidejű bejutását a vese parenchimából fehérjetartalom ritkán haladja meg az 1 g / l-t.

A renalis proteinuria a legtöbb esetben a glomerulusok fokozott áteresztőképességéhez kapcsolódik, és két csoportra oszlik:

A fiziológiai proteinuria magában foglalja a fehérjék átmeneti megjelenését a vizeletben, amely nem kapcsolódik a betegségekhez:

nem denaturált fehérjékben (nyers hús, nyers tojás) gazdag étel elfogyasztása után;

intenzív izmos munkával (hosszú túrák, sportesemények);

hideg fürdő vagy zuhanyozás közben;

erős érzelmi tapasztalatokkal;

epilepsziás rohamokkal.

Megkülönböztesse az ortostatikus vagy a fiatalos, proteinúrát, amely gyermekekben és serdülőkben fordul elő, és öregszik. A differenciáldiagnosztikai viszonyban gyakorlati szempontból fontos, hogy az ortosztatikus albuminuria gyakran megtalálható az akut glomerulonefritiszből való kilábalás időszakában.

A patológiás vese proteinuria a vesék és más szervek és rendszerek szerves betegségeinek következménye: akut glomerulonefritisz; krónikus glomerulonefritisz; akut pyelonefritisz; krónikus pyelonefritisz; terhes nők nefropátia; különböző lázzal járó betegségek; súlyos krónikus szívelégtelenség; és enyhe vesebetegség; lipoid nephrosis; vese-tuberkulózis; vérzéses láz; vérzéses vaszkulitisz; súlyos vérszegénység; magas vérnyomás stb.

2. feladatszám. A fehérje fehérje meghatározására szolgáló laboratóriumi módszerek átírása és rajzolása.

Laboratóriumi módszerek a fehérje fehérje meghatározására a vizeletben

Minőségi és kvantitatív módszerek vannak a fehérje fehérje meghatározására, ezek a fehérje koagulációján alapulnak a vizelet térfogatában vagy a tápközeg határán (vizelet és sav); a koaguláció mértékének mérése során a minta kvantitatív.

minta (standardizált) 20% -os szulfosalicilsavval;

Geller gyűrűvizsgálat (jelenleg nem használt);

fehérje detektálás indikátorpapírral (szalagokkal) és tesztcsíkokkal.

az egységes Brandberg-Roberts-Stolnikov módszer;

3% szulfosalicilsavval.

Minőségi módszerek a fehérje fehérje meghatározására

3. feladatszám. A fehérje meghatározása a vizeletben standardizált mintával 20% -os szulfosalicilsavval

A módszer elve: a fehérje koagulációján alapul a vizelet térfogatában vagy a közeg határán (vizelet és sav).

Ételek, berendezések és reagensek:

20% szulfosalicilsav (2-hidroxi-5-szulfobenzoesav ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3 ml szűrt vizelet

2 db kémiai kémcsövek

Három szűrt vizelet csövet vezetünk be két csőbe, 6-8 csepp szulfosalicilsavat adunk az egyikhez (tapasztalt). Sötét alapon mindkét csövet összehasonlítjuk.

Az eredmények értelmezése:

A kémcsőben az opacifikáció jelzi a fehérje jelenlétét a vizeletben - a minta pozitív.

Megjegyzés. A lúgos vizeletet a vizsgálat előtt savanyítjuk, néhány csepp 10% -os ecetsavoldattal.

4. feladatszám. A fehérje meghatározása Geller gyűrűvel végzett vizsgálat segítségével

A módszer alapelve: A gyűrűminta azon a tényen alapul, hogy amikor a felületen (sav - vizelet) a vizelethez fehérje jelenlétében salétromsavat adunk, koagulálódik, és fehér gyűrű jelenik meg.

Ételek, berendezések és reagensek:

- reagensek: 30% -os salétromsavoldat (HNO 3) (d = 1,2) vagy laryonreaktáns: 20-30 g nátrium-kloridot (NaCl) 100 ml desztillált vízben oldva, melegítve, lehűtve, szűrve; 99 ml szűrlethez 1 ml tömény HN03-oldatot adunk.

A csőbe öntsünk 1-2 ml 30% -os HNO3-oldatot vagy Larionova-reagenst, és óvatosan rétegezzük ugyanazt a szűrt vizeletet a falra.

Az eredmények értelmezése:

A vékony fehér gyűrű 2. és 3. percében két folyadék határán való megjelenése jelzi a fehérje jelenlétét a vizeletben.

Rajzolj egy rendszert a fehérje meghatározására

Fehérje mennyiségi meghatározása

A módszer elve: A Geller-gyűrű mintája azon a tényen alapul, hogy amikor a felületen (sav - vizelet) a vizelethez fehérje jelenlétében salétromsavat adunk, koagulálódik és fehér gyűrű jelenik meg.

Ételek, berendezések és reagensek:

Biológiai folyadék (vizelet);

A csőbe öntsünk 1-2 ml 30% -os HNO3-oldatot vagy Larionova-reagenst, és óvatosan rétegezzük ugyanazt a szűrt vizeletet a falra.

Az eredmények értelmezése:

A két folyadék megjelenése a 2. és 3. perc között
egy vékony fehér gyűrű a fehérje jelenlétét mutatja körülbelül 0,033 g / l koncentrációban. Ha a gyűrű a laminálás után 2 perccel előbb jelenik meg, a vizeletet desztillált vízzel kell hígítani, majd hígított vizelettel újra tesztelni. A vizelet hígítási fokát a gyűrű típusától, szélességétől, tömörségétől és a megjelenés időpontjától függően választjuk ki.

A szálszerű gyűrűvel, amely 2 perc múlva megjelent, a vizeletet 2-szer hígítjuk, széles, egy-négyszeres, tömör egy - 8 alkalommal, stb. A fehérjekoncentrációt úgy számítjuk ki, hogy a hígítást 0,033 g / l-vel megszorozzuk.

Egy nagy számú urát esetén fehér gyűrű képződhet; ellentétben a fehérjével, kissé meghaladja a két folyadék határát, és enyhén felmelegszik.

6. feladatszám. A fehérje mennyiségének meghatározása a vizeletben 3% -os szulfozicilsavval

A módszer elve: A fehérje koncentrációja a vizeletben arányos a zavarossággal, amely akkor keletkezik, amikor a szulfosalicilsavat koagulálja

Ételek, berendezések és reagensek:

0,9% -os nátrium-klorid-oldat;

1% -os albumin standard oldatot - 1 g liofilizált albumint (humán vagy szarvasmarha szérumból) kis mennyiségű 0,9% -os nátrium-klorid-oldatban feloldunk 100 ml-es lombikban, majd az oldattal azonos oldószerrel töltöttük fel. A reagenst 1 ml 5% -os nátrium-azid-oldat (NaN 3) hozzáadásával stabilizáljuk. Hűtőben tárolva a reagens 2 hónapig stabil.

1,25 ml szűrt vizeletet vezetünk be egy kémcsőbe, 3,75 ml 3% -os szulfosalicilsav-oldatot adunk hozzá és keverjük. 5 perc múlva a mintát 590–650 nm hullámhosszon (narancssárga vagy piros fényszűrő) PEC-vel fotométerezzük 5 mm-es optikai úthosszúságú küvettában. A kontroll mintaként 3,75 ml 0,9% -os nátrium-klorid-oldatot adunk 1,25 ml vizelethez. A fehérjekoncentrációt egy kalibrációs gráf szerint számítjuk ki, amelynek előállításához standard albumin oldat hígításait állítjuk elő. (lásd a táblázatot). Minden hígított oldatból 1,25 ml-t veszünk, és kísérleti mintákként kezeljük.

Hígítások készítése kalibrálásra

Standard oldat, ml

0,9% nátrium-klorid-oldat, ml

Fehérje koncentráció, g / l

Az extinkció és a fehérje koncentráció nagyságának függőleges függését 1 g / l-ig tartjuk. Magasabb fehérjekoncentrációk esetén a mintát hígítani kell, és figyelembe kell venni a számításban a hígítást.

Ha a vizeletben jód tartalmú anyagok vannak, hamis pozitív eredményeket lehet elérni. Ezért a tesztet nem lehet alkalmazni a jódkészítményt szedő vagy a jódtartalmú radioplasztikus vegyületeket vizsgáló betegeknél. A hamis pozitív J-reakciókat a vizsgálat során a szulfanilamid-gyógyszerek, a nagy penicillin-adagok és a húgysav vizeletének magas koncentrációi okozhatják.

Rajzolj egy rendszert a fehérje meghatározására

7. feladatszám. Bens-Jones felismerés a vizeletben

A módszer alapelve: a termopecipitáció reakciója

Ételek, berendezések és reagensek:

Reagens: 2M acetát puffer, pH 4,9.

4 ml szűrt vizeletet összekeverünk 1 ml pufferoldattal, és 15 percig melegfürdőben 56 ° C-on melegítjük.

Az eredmények értelmezése:

Bens-Jones fehérje jelenlétében a vizeletben az első 2 percben kifejezett üledék jelenik meg.

Ha a fehérje koncentrációja kisebb, mint 3 g / l, a minta negatív lehet, ami meglehetősen ritka, mivel általában a Bens-Jones fehérje koncentrációja a vizeletben igen jelentős.

A Bens-Jones fehérje legmegbízhatóbb kimutatása 40-60 ° C hőmérsékleten történő kicsapással történik. Azonban túl vizes (pH-nál kevesebb, mint 3,0) vagy túl lúgos (pH-nál több mint 6,5) vizelettel, alacsony vizelet-sűrűséggel és alacsony Bens-Jones bézs koncentrációval (kevesebb, mint 3 g / l), az üledék nem fordulhat elő.

Rajzolj egy rendszert a fehérje meghatározására

II modul. Független munka a kutatási szakasszal

1. feladatszám. Tanulmányozzuk és vázoljuk fel az 1. számú "fehérje kimutatása diagnosztikai tesztcsíkok segítségével" alkalmazást

- A biológiai folyadék (vizelet) mintáit a tanártól szerezze be;

- Vizetesztet kell végezni diagnosztikai tesztcsíkok alkalmazásával;

- Értékelje az eredményt (norma, patológia). Tegyük fel a fehérje okát a vizeletben.

- Írja be az eredményt az elemzési űrlapokba, adja át a tanárnak.

"A fehérje kimutatása diagnosztikai tesztcsíkokkal"

Elv. A fehérje megváltoztatja a szalagra alkalmazott indikátor színét. Az indikátorok 100 csíkba vannak csomagolva, amelyeket egy zárt pencil tokban tárolnak, hűvös és száraz helyen.

A diagnosztikai tesztcsíkok használatára vonatkozó szabályok

A diagnosztikai tesztcsíkok használatakor a következő szabályokat kell betartania:

- tartsa a diagnosztikai tesztcsíkokat szorosan lezárt tartálycsomagokban;

- az esetek sötét, száraz, hűvös helyen, 30 ° C-nál nem magasabb hőmérsékleten, de nem a hűtőszekrényben történő tárolására;

- Ne tegye ki a szalagokat nedvességnek és közvetlen napfénynek, magas hőmérsékletnek és illékony vegyszereknek;

- csak a szigorúan szükséges számú csíkot kapja, majd azonnal zárja be az ügyet;

- Ne érintse meg az ujjaival a diagnosztikai zónákat.

Tesztszabályok

1. A vizsgálathoz használjon egy egyszer használatos műanyag vizelet-tartályban (vagy tiszta száraz edényekben) gyűjtött reggeli vizeletet. Keverjük össze a leadott vizeletet, de ne centrifugáljuk.

Ha nem szabványosított csomagolást használ, a vizeletgyűjtő tartályban lévő tisztítószer maradványai hamis eredményt adnak.

2. A ceruza tokból vegyen egy tesztcsíkot.

3. Azonnal zárja le a burkolatot a gyári fedéllel, védje a szalagot a nedvességtől.

4. Engedje le a jelzőpapír-szalagokat 2-3 másodpercig a vizsgált vizeletbe, és azonnal távolítsa el őket.

5. A felesleges nedvesség eltávolításához a csík diagnosztikai zónáiból, hosszú tartóval futtassuk a tartály szélén (vagy más tartályban, amelyben a vizeletet szállítják), vagy csatlakoztassa a szalag szélét a szűrőpapírhoz.

Lehetetlen lemosni a felesleges vizeletet a diagnosztikai zónákból.

6. A tartály címkéjén vagy az egyes tesztek utasításaiban megadott idő után lejár, hasonlítsa össze a megfelelő diagnosztikai zóna színét a tartály címkéjén található színskála színével (standard). A vizsgálati eljárást az 1-7.

7. A reakció pozitív vagy negatív. Vagy számszerűen kifejezve g / l-ben. (lásd a 8. ábrát).